معماری
9

تشخیص ویبریو کلرا (التور )

 

سلام به همه دوستان و همکاران عزیز

الان تقریبا یک هفته هستش که از مثبت شدن اولین مورد التور در سیستان و بلوچستان میگذره و این فرصت خیلی خوبی شد برای من تا با نحوه تشخیص این باکتری اشنا بشم.

در این مدت ما هم ۲ مورد مثبت داشتیم.

در طول انجام ازمایشات عکس هایی رو گرفتم و نکاتی رو بدست اوردم که سعی میکنم اینجا بذارم تا سایر دوستان هم استفاده کنند.من فقط چند روز هستش که با تشخیصو

نکاتش اشنا شدم و اگر دوستان کثری و کمبودی میبینن به حساب کم تجربگی بنده بذارن ولی بنده سعی کردم تمام نکاتی رو که علمی و ثابت شده است رو اینجا بیارم.
———————————————————————————————-

در ابتدا که فردی با علائم التور مراجعه میکند برای ارسال نمونه به ازمایشگاه از محیط های کری بلیر استفاده میشد.که به صورت جامد میباشند و شیری رنگ هستند.معمولا ۲ عدد سوآپ الوده شده به نمونه مدفوع فرد رو داخل این محیط فرو میبرند و به ازمایشگاه منتقل میکنند.

تصویر محیط کری بلیر :

1
نمونه همراه با فرمی به ازمایشگاه ارسال میشود که شامل نام بیمار نام پدر ، سن ، تاریخ بروز علائم ، تاریخ نمونه گیری ، تاریخ ارسال به ازمایشگاه ، بستری یا سرپایی بودن است .

موارد ذکر شده را به صورت کامل وارد دفتر مخصوص التور کنید و به هر بیمار شماره ای را اختصاص دهید.

برای هر بیمار یک محیط TCBS و پپتون ( آب پپتون ) در نظر بگیرید و شماره هر بیمار را روی محیط ها درج کنید.

محیط TCBS سبز رنگ بوده و در پلیت تهیه میشود. ( نحوه ساخت رو در مراحل بعدی ذکر میکنم )

تصویری از محیط TCBS :

2
تصویری از پپتون :
3
محیط پپتون یک محیط تقویتی برای باکتری میباشد و در صورت ضعیف بودن باکتری موجب تقویت ان میشود.

۵ تا ۸ ساعت پس از اینکه نمونه را وارد ۲ محیط کردیم برای بار دوم از محیط آب پپتون نمونه را بر روی محیط TCBS میبریم تا در صورت عدم رشد در محیط اول به دلیل ضعیف بودن باکتری در صورت وجود باکتری در محیط دوم رشد انجام شود.

پس از ۱۸ ساعت محیط ها را چک میکنیم.در صورت وجود باکتری محیط زرد رنگ میشود و کلنی هایی زرد و گرد ایجاد میشود.(این علامت قطعی نیست و فقط نشانه ای است که مارا وادار به انجام سایر مراحل ازمایش میکند.باکتری هایی مثل پروتئوس و ای کولی هم میتوانند محیط را زرد رنگ کنند )

تصویری از کلنی های التور :

4
پس از مشکوک شدن به کلنی ها وارد مرحله بعدی تشخیص میشویم.

مقداری از کلنی هارا روی محیط KIA و مقداری هم روی SIM میبریم.

محیط KIA محیطی سطحی و عمقی است

تصویری از محیط های KIA :

5
محیط KIA پس از چند ساعت به صورت الکالن اسید در می آید یهنی روی محیط صورتی رنگ و قسمت پایینی زرد میشود.

تصویری از محیط KIA بعد از رشد ویبریو :

6
محیط SIM که یک محیط عمقی است و برای بررسی حرکت باکتری و ححلقه اندول از ان استفاده میشود.

تصویری از محیط SIM پس از رشد باکتری : ( کدر شدن اطراف قسمتی که انس وارد محیط شده نشانه حرکت باکتری است که توی عکس تقریبا مشخصه )

7
پس از اضافه کردن چند قطره معرف کواکس به محیط SIM حلقه قرمز رنگ اندولی تشکیل میود که یکی از نشانه های تعیید ویبریو میباشد.

خب با مشاهده این نشانه ها به جواب نزدیک میشویم و تقریبا مطمئن میشیم که باکتری عامل وباست اما برای تایید دو مرحله دیگر باقی مانده.

تایید با انتی سرم های پلی والان و تعیین سوش باکتری :

ابتدا یک قطره سرم فیزیولوژی روی لام میگذاریم و مقداری از باکتری را در ان حل میکنیم و سپس مقداری از انتی سرم پلی والان را در ان حل میکنیم و چند دقیقه روی روتاتور میگذاریم.در صورت ایجاد اگلوتینه وجود ویبریو تایید میشود. ( کلنی را از محیط KIA بر میداریم )

۳ نوع سوش از ویبریو وجود دارد که در کیت ها انتی سرم سوش اینابا ( Inaba ) و اگاوا ( ogawa )وجود دارد که در صورت واکنش با هر کدام همان سوش گزارش میشود و در

صورت اگلوتینه دادن با هر دو انتی سرم اینابا و اگاوا سوش هیکوجیما گزارش میشود.

مرحله نهایی تایید تست اکسیداز است.

قطره ای از محلول اکسیداز را روی لام قرار دهید و یک قطعه کاغذ صافی کوچک روی ان قطره قرار دهید تا کاغذ خیس شود.مقداری از کلنی باکتری را روی کاغذ قرار دهید ( کلنی

را از روی محیط kIA بر میداریم ) در صورت مثبت بودن تست اکسیداز قسمتی از کاغذ که به کلنی اغشته شده است صورتی تا ارغوانی زنگ میشود .

دوستان یک جمع بندی هم از نتایج داشته باشیم :

مثبت : الکالن اسید در محیط KIA . حرکت در SIM . حلقه اندول در SIM . گاز منفی در KIA . منفی بودن SH2 . تایید توسط انتی سرم پلی والان. اکسیداز مثبت.

منفی : با توجه به موارد گفته شده در گزارش مثبت

ناگ : زمانی که تمام مراحل ویبریو را تایید میکند و فقط اگلوتیناسیون با انتی سرم پلی والان منفی باشد جواب ناگ گذارش میشود.

——————————————————————————————–
ان شالله اگر مطلب جدیدی در این رابطه به معلومات بنده اضافه شد همینجا ادامه میدم تاپیک رو . نحوه تهیه مواد و محلول ها رو هم به زودی قرار میدم.



تشخیص ویبریو کلرا (التور )

سلام به همه

در قسمت قبل گفته بودم که روی محیط TCBS امکان رشد پروتئوس ها و ای کولی هم وجود داره.امروز به همچین موردی بر خوردم که از کلنی های پروتئوس عکس گرفتم تا تفاوت کلنی های ویبریو بهتر نشون داده بشه.

البته بعد از رشد باکتری حتما باید کلنی باکتری رو روی محیز های SIM و KIA ببرید و که در پروتئوس در SIM تولید SH2 دیده میشه و محیط سیاه میشه و در محیط KIA هم حالت الکالن اسید دیده نمیشه.
کلنی های ویبریو شفاف و براق هستند و میشه اینجوری با سایر کلنی ها تمیز دادشون.

به تصاویر زیر دقت کنید.عکس اول کلنی التور و عکس دوم کلنی پروتئوس هستش.

8
9
نویسنده : علی بختیاری

پاسخ دهید