خانه > میکروب شناسی و آنالیز ادرار > گزارش کار رنگ آمیزی گرم

گزارش کار رنگ آمیزی گرم

نحوه رنگ آمیزی و شرح آزمایش گرم باکتری،کامل ترین و بهترین شیوه و گزارشکار کامل برای رنگ آمیزی گرم شامل تصاویر،مرحله انجام کار،مقدمات،وسایل مورد نیاز،منابع خطا،کنترل کیفی و …

خلاصه ای ابتدای گزارشکار در زیر:

رنگ آمیزی گرم (Gram staining):رنگ‌آمیزی گرم یکی از مهم ‌ترین و متداولترین روش‌های رنگ آمیزی در علم میکروب شناسی است که برای اولین بار در سال ۱۸۸۴ توسط پزشک و میکروب شناس دانمارکی بنام هانس کریستین  گرم (Hans Christian Gram ) موقع رنگ آمیزی  برای متمایز کردن باکتریهای مولد ذات الریه از هسته سلولهای میزبان ابداع شد . این رنگ آمیزی که مهمترین و کاربردی ترین رنگ آمیزی افتراقی میکروب شناسی است .

در حالت کلی باکتری ها را به دو دسته یا گروه بزرگ گرم مثبت و گرم منفی تقسیم می کند در سال ۱۹۲۱هوکر (George J. Hucker)  میکروب شناس آمریکایی با اصلاحات جزئی در روش رنگ آمیزی گرم ارتقاء و بهبود این روش شد. در آزمایشگاه میکروب شناسی بالینی، رنگ آمیزی گرم آزمایشی مهم برای تشخیص احتمالی سریع عوامل عفونی است. این آزمایش برای طبقه بندی باکتری ها بر اساس شکل، اندازه، مورفولوژی سلول و واکنش گرم آنها به کار می رود.

اساس روش رنگ آمیزی گرم، ناشی از تفاوت ساختاری در یواره سلولی باکتریهای گرم منفی و گرم مثبت است. به این ترتیب که ضخامت لایه پپتیدوگلیکان (ترکیب اصلی دیواره سلولی) در باکتریهای گرم مثبت خیلی بیشتر از باکتریهای گرم منفی می باشد لذا اساس رنگ آمیزی گرم به ساختمان و ترکیب دیواره سلولی باکتری بستگی دارد .

در این روش ابتدا رنگ بازی کریستال ویوله بکار می رود که همه باکتریهای کشته شده و تثبیت شده بر روی لام آن را جذب می نمایند و سپس محلول رقیق ید به عنوان دندانه (Mordant) افزوده می شود که رسوبی از کمپلکس کریستال ویوله  و ید در پروتوپلاسم تشکیل می دهد.

در مرحله بعدی رنگ آمیزی وقتی که از  رنگبر استفاده می شود در باکتری های گرم مثبت ساختار شیمیایی اصلی دیواره، یعنی پپتیدوگلیکان، لایه ای ضخیم است و پس از متراکم شدن در اثر آبگیری با رنگبری، نفوذناپذیر شده و مانع از خروج کمپلکس کریستال ویوله و ید از سلول می شود.

ولی در دیواره سلولهای گرم منفی، پپتیدوگلیکان لایه ظریفی از دیواره را تشکیل می دهد و بقیه دیواره از جنس چربی هاست که در رنگبر حل شده و از بین می رود و لذا امکان رخنه افزایش یافته و کمپلکس کریستال ویوله ید به راحتی از پروتوپلاسم شسته شده و از سلول خارج می شود. تا بدین مرحله گرم منفی ها بی رنگ شده و گرم مثبت ها همچنان بنفش باقی مانده اند.

در مرحله پایانی رنگ آمیزی، از رنگ ثانویه یا رنگ مخالف  (Counterstain) استفاده می شود و باکتری های گرم منفی که کمپلکس رنگی خود را از دست داده اند در نتیجه افزودن رنگ قرمز سافرانین، قرمز رنگ می شوند )گرم منفی(. ولی باکتری هایی که در اثر افزودن رنگبر (Decolorizer)، رنگ خود را از دست نداده اند با افزودن رنگ سافرانین، همچنان رنگ قبلی یعنی بنفش را نگه داشته و نشان می دهند )

    معرف ها و محلولهای مورد نیاز:
معرف ها ممکن است به صورت تجاری خریداری شوند یا در آزمایشگاه تهیه گردند.
۱-    محلول کریستال ویوله
طرز تهیه:
•    پودر کریستال ویوله                            ۲۰ گرم
•    اتانول۹۶ درجه                                  ۱۰۰ میلی لیتر
محلول ذخیره و مصرفی کریستال ویوله، در ظرف تیره و در دمای اتاق نگهداری می‌شود.
تهیه اگزالات آمونیوم
•    پودر اگزالات آمونیوم                   یک گرم
•    آب‌ مقطر                               ۱۰۰ میلی لیتر
هنگام مصرف، محلول کریستال ویوله ذخیره را به نسبت ۱:۱۰ با آب‌ مقطر رقیق ‌نمایید. (۱ میلی لیتر از محلول کریستال ویوله و ۹  میلی لیتر آب‌ مقطر) سپس این محلول را با چهار حجم از محلول اگزالات آمونیم رقیق کنید (۱ میلی لیتر محلول کریستال ویوله رقیق شده و ۴ میلی لیتر اگزالات آمونیم).
۲-    محلول لوگل
روش تهیه:
•    ید                                         ۱ گرم
•    یدور پتاسیم                             ۲ گرم
•    آب ‌مقطر                               ۲۴۰ میلی لیتر
•    محلول آبی بیکربنات سدیم۵%       ۶۰ میلی لیتر
•    در مقدار کمی از آب‌ مقطر، ید و یدور پتاسیم را کاملاً حل نمایید، بعد حجم را با آب‌ مقطر به ۲۴۰ میلی لیتر  برسانید. محلول ۵% بیکربنات سدیم (بیکربنات سدیم: ۵ گرم در ۱۰۰ میلی لیتر آب ‌مقطر) را نیز به آن اضافه ‌نمایید. محلول در دمای اتاق نگهداری می شود . درب آنرا باید کاملا” محکم ببندید.
احتیاط: ید خاصیت خورندگی دارد. از استنشاق، خوردن یا تماس آن با پوست خودداری کنید.
۳-    رنگ بر
    الکل ـ استون
حجم مساوی از الکل اتیلیک (اتانول) را با استون بسته به نیاز مخلوط نمایید. مثلا” مخلوطی از ml 100 اتانول و  ml100 استون را در بطری شیشه ای قهوه ای رنگ ترکیب کنید، با یک سال تاریخ انقضاء، برچسب بزنید و در حرارت اتاق نگهداری کنید.
۴-    رنگ متقابل یا رنگ ثانویه  (Counterstains)
روش تهیه فوشین ذخیره:
•    پودر فوشین                          ۲ گرم
•    اتانول                                  ۱۰۰ میلی لیتر
روش تهیه سافرانین ذخیره:
•    پودر سافرانین                            ۵/۲ (دو ونیم ) گرم
•    اتانول                                     ۱۰۰ میلی لیتر
به هنگام مصرف، محلول ذخیره فوشین یا محلول ذخیره سافرانین را به نسبت ۱:۱۰ با آب‌ مقطر رقیق نمایید. محلولها در ظروف تیره، تهیه و در دمای اتاق ذخیره می شوند.
    وسایل و مواد مورد نیاز
۱-    لام شیشه ای ( mm75×۲۵)
۲-    NaCl 85/0% (سرم فیزیولوژی) استریل

 

متن کامل و ادامه در فایل زیر:قیمت ۱۰۰۰ تومان

RIAL 10,000 – گزارشکار رنگ گرم