معماری

اندازه گیری پروتئین 24 ساعته

اندازه گیری پروتئین 24 ساعته

ابتدا مقدار 10سی سی ادرار را درون لوله شیشه ای میریزیم.
ادرار را به مدت 3 دقیقه با دور 3000 سانتریفوژ میکنیم.
نوار ادراری را درون ادرار فرو برده و مقدار پروتئین انرا ثبت میکنیم.
اگر غلظت پروتئين بيش از ۱+ بود نمونه ادرار را قبل از شروع آزمايش با سرم فيزيولوژي رقيق مي كنيم.
نمونه هاي ۱+ تقريباً به نسبت ۵۰/۱
نمونه هاي ۲+ تقريباً ۱۰/۱
نمونه هاي ۳+ تقريباً ۱۵/۱
اگر نيتريت ادرار مثبت باشد، مي بايست بيمار را براي نمونه گيري مجدد با رعايت شرايط نمونه گيري راهنمايي نموده و در صورت تكرار آلودگي نمونه، بيمار جهت مشاوره و لزوم بررسي نتايج كامل ادرار و احتمالاً درخواست كشت به پزشك معرفي گردد.

مراحل ازمایش

ما به 4 لوله نیاز داریم به نام های
تست
استاندارد
کنترل
بلانک

روش انجام ازمایش

روش تری کلرواستیک 12.5 درصد(TCA) برای اندازه گیری پروتئین در ادرار  24 ساعته:
ابتدا مراحل تهیه محلول TCA:
12.5 گرم از پودر TCA را در مقدار کمی اب مقطر حل کنید
سپس با استفاده از اب مقطر حجم محلول را به100 سی سی برسانید.

ادامه کار:
ابتدا 4 لوله شیشه ای که ذکر شد را اماده کرده و طبق دستورالعمل زیر مواد لازم را درون لوله ها بریزید.
لوله تست:۱/۶ سی  سی ادرار+400 لاندا TCA
لوله کنترل:۱/۶ سی سی محلول کنترل+400 لاندا TCA
لوله استاندارد:۱/۶ سی سی محلول استاندارد+400 لاندا TCA
لوله بلانک جهت صفر کردن دستگاه فتومتر:۱/۶سی سی سرم فیزیولوژی +400 لاندا TCA

سپس لوله ها رادقیقا 35 دقیقه در دمای اتاق قرار میدهیم.
حال لوله ها را 5 دقیقه با دور 4000 سانتریفوژ میکنیم.
فتومتر را روی 405nm تنظیم کنید
توسط بلانک فتو متر را صفر کنید.
جذب لوله ها را بدست اورده و در فرمول زیر قرار دهید

پروتئين = ضريب رقت نمونه * حجم ادرار ۲۴ ساعته به میلی ليتر * F * جذب نوري آزمايش

F=ارزش استاندارد/OD استاندارد

نكات قابل توجه :

كدورت حاصله از اضافه شدن TCA به ادرار به دليل وجود آلبومين و گلبولين مي باشد.
میزان ph  قليايي و پيگمانهاي ادرار باعث ايجاد نتايج مثبت كاذب میشود
دفع پروتئين در ادرار به طور دائم ثابت و مشخص نمي باشد و در دوره هاي۲۴ ساعته تغيير قابل ملاحظه اي دارد. بنابراين براي اندازه گيري پروتئين دفع شده بهتر است از ادرار ۲۴ ساعته استفاده نمود.

ممكن است نتايج بدست آمده از روش كدورت سنجي TCA با بررسي ادرار توسط نوارهاي ادراري تفاوت داشته باشد. مشاهده نتايج منفي يا مقادير كمي پروتئين با نوار ادراري و نتيجه مثبت با روش TCA به طور همزمان ممكن است به دلايل زير باشد :

وجود پروتئين Myeloma (گاما گلبولين و پروتئين بنس جونز) در ادرار.
نمونه هاي غير هموژن به علت استفاده از داروهاي خاص مانندTolmetin و داروهاي ضد التهاب كه در درمان آرتريت روماتوئيد استفاده مي شود. متابوليتهاي اين داروها مي تواند باعث ايجاد نتايج مثبت كاذب شود.

پاسخ دهید